尊龙凯时推出的本检测试剂盒是依据探针法荧光定量PCR原理研发的，具备以下特点：

产品特点

1. 即开即用，用户仅需提供样品DNA模板。
2. 引物等组分进行了优化，灵敏度高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，确保不会与其他生物样本的DNA产生交叉反应。
5. 此产品可用于定性及定量检测，定量检测时线性范围至少为五个数量级。
6. 本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品仅限于科研用途。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

采用自选方法提取样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

由于阳性对照浓度较高，请在独立区域进行稀释，以避免污染样品或本试剂盒的其他成分。
1. 标记六个离心管，分别为7、6、5、4、3、2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，保存于冰上。
4. 重复相应稀释步骤以获得6个稀释度的标准曲线样品。若无需制作标准曲线，仅需将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）

根据待测样品数量，准备N+2个qPCR管，分别加入规定的成分（详见说明书，索取可联系尊龙凯时）。然后转移至样本准备区。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板以及阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器样品槽中，按程序进行扩增（详见说明书，索取可联系尊龙凯时）。

六、结果分析

1. 制作标准曲线时，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线，通过Ct值推算样品DNA浓度的log值。
2. 若未制作标准曲线，根据以下标准判定结果：
- 阳性对照：Ct值<30，表现出明显的指数增长和典型的S型曲线。
- 阴性对照：Ct值≥38或无Ct值，无明显指数增长或平台期。
- 样本检测：Ct值<35则阳性；Ct值≥38则阴性；Ct值在35-38范围需复检。

运输及保存

请在低温下运输，并在-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照应单独放置，避免污染其他试剂。使用尊龙凯时的试剂盒，确保您的实验结果准确可信。