背景介绍

谷胱甘肽（GSH）作为细胞内重要的抗氧化剂，其浓度的高低直接反映了肿瘤细胞的氧化还原状态。尤其在肺癌细胞中，常依赖于高GSH水平来抵御放化疗所产生的活性氧（ROS），这导致了治疗的抗性。作为谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的辅因子，GSH能够抑制铁死亡，而当其被消耗后则会导致GPX4失活，从而促进铁死亡。因此，GSH水平的变化被视为铁死亡的重要标志。

动态监测GSH的水平，可以有效评估治疗是否激活了氧化应激及铁死亡通路。此外，GSH的检测同样能验证GSH响应性药物的释放效率，实现肿瘤的特异性激活。

谷胱甘肽检测在肺癌研究中的应用

在2025年5月8日，复旦大学药学院的陈依婷博士等人在《Journal of Nanobiotechnology》（IF=106）期刊上发表了题为“Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitrite augmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer”的研究论文。研究小组设计了一种基于多不饱和脂肪酸（PUFA）的纳米反应器DHA-N@M，通过吸入给药方式作用于肺部肿瘤。

该纳米反应器由巨噬细胞膜包裹的GSH响应性NO释放前体DHA-SNO构成，具备肿瘤靶向性与GSH响应特性。实验结果表明，DHA-N@M显著提升了药物在肺肿瘤中的蓄积量，其效果优于静脉注射。其作用机制在于通过消耗GSH、释放NO并生成ONOO⁻，诱导肿瘤细胞的铁死亡，与放疗联用则能协同增强抗肿瘤效果。在肺癌原位模型中，DHA-N@M联合放疗显示出高达9391%的肿瘤抑制率，并且具有良好的安全性。这项研究为肺癌治疗提供了一种创新的吸入式纳米药物递送系统，通过靶向肿瘤微环境和增强铁死亡，显著提升了放疗效果，展现出重要的临床转化潜力。

使用谷胱甘肽检测试剂盒（abs580006）的详细方法

一、试剂盒组分

组分规格储存条件：

• 96-Well Microplate: 1 plate—
• Assay Buffer: 30 mL×4，4°C
• Reaction Buffer: 8 mL×1，4°C
• Dye Reagent: Powder×1，4°C，避光保存
• Diluent: 4 mL×1，4°C
• Standard: Powder×1，4°C，避光保存
• Technical Manual: 1 Manual—

二、操作步骤

1. 材料和试剂准备

自备材料包括酶标仪、蒸馏水、移液器与枪头、研钵、离心机、计时器、湿冰等。标准品：使用前将0.65 mL蒸馏水加入管中，混匀至完全溶解；然后取0.05 mL溶液加入到0.95 mL蒸馏水中混合均匀，获得浓度为0.5 mmol/L的标准品溶液，4°C储存。Dye Reagent：使用前加入4 mL Diluent溶解。

2. 样本处理

（1）细胞/细菌样本：将细胞/细菌（5×10⁶）收集到离心管中，离心后去掉上清液，加入1 mL Assay Buffer，超声处理后于4°C，8000 g离心10分钟，上清液转移至新离心管中，湿冰保存待检测。

（2）组织样本：称取0.1 g组织，加入1 mL Assay Buffer在湿冰上匀浆，4°C，8000 g离心10分钟，上清液转移至新离心管中，湿冰保存待检测。

（3）血清/血浆样本：可直接检测。

3. 上样及检测

上样前将所有试剂加热至37°C，然后按照以下表格进行上样：

• 试剂空白对照孔：Sample—80 μL；
• 标准品孔：Standard-80 μL；
• 样品孔：Distilled water 80 μL。

混合均匀，37°C孵育10分钟，在412 nm处测量并记录吸光度。

4. 标准曲线

标准曲线仅供参考，每次实验必须制作新的标准曲线。检测范围为0.01 mmol/L至0.5 mmol/L。

常见问题解答：

Q1：试剂盒中的96-Well Microplate只有一个，不够实验使用怎么办？

A1：该试剂盒中赠送的96孔板可以在后续实验中使用常规的96孔酶标板替代。

Q2：试剂盒操作说明书中既有标准曲线法又有公式法，我该选择哪种计算方式？

A2：可任选其一，公式法为简便算法；建议使用标准曲线法，会更加准确。请注意每次实验需重新绘制标准曲线。

Q3：反应过程中出现沉淀，应该如何处理？

A3：沉淀或絮状物通常因蛋白质浓度过高所致，建议将样品离心提取上清再进行检测。

Q4：仪器无相应检测波长该怎么办？

A4：若仪器设置中无推荐的检测波长，可在说明书推荐波长附近±10 nm内寻找，一般是可接受的。

参考文献：

[1] Chen Y, Huang X, Hu R, et al. Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitrite-augmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer. J Nanobiotechnology 2025; 23(1):338. Published 2025 May 8. doi:10.1186/s12951-025-03409-8.

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